Investigación y recuento de enterobacterias lactosa-positivas: coliformes

CARACTERÍSTICAS DE LOS COLIFORMES

• Pertenecen a la familia Enterobacteriaceae.
• Está formado por varios géneros:
• Escherichia.
• Klebsiella.
• Citrobacter.
• Enterobacter.
• Se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con producción de ácido láctico y gas, en 24-48h a 30-37º.
• Se encuentran en el intestino de hombre y animales, pero también en suelos, semillas, vegetales...
• Se introducen al medio ambiente a través de las heces de humanos y animales.
• Indicadore de contaminación fecal en el control de calidad del agua destinada al consumo humano.
• Bacilos Gram -, no esporulados.
• Oxidasa negativos.
• Aerobios y anaerobios facultativos.

PREPARACIÓN DE LAS DILUCIONES DECIMALES

MATERIAL:

- 3 tubos de 9ml de agua destilada estéril.

- Pipetas y puntas.

- Mechero Bunsen.

- Agitador orbital.

PASOS A SEGUIR:

1. Transferir 1ml de la muestra de agua a analizar a un tubo que contenga 9ml de agua (dilución1/10).

2. A partir de la mezcla anterior incorporar 1ml a otro tubo que contenga 9ml de agua estéril (dilución 1/100).

3. Repetir este proceso y obtener la dilución 1/1000.

RECUENTO EN MEDIO LÍQUIDO

MATERIAL:

- 3 series de 3 tubos con 10ml de medio de cultivo Brillant Green Bile Lactose (BGBL).

- Camapanas Durhamn.

- Pipeta y puntas.

- Mechero Bunsen.

- Estufa de cultivo.

PASOS A SEGUIR:

1. En cada uno de los tubos de la 1º serie (1ml de la dilución 1/10).

2. En cada uno de los tubos de la 2º serie (1ml de la dilución 1/100).

3. En cada uno de los tubos de la 3º serie (1ml de la dilución 1/1000).

4. Incubar las tres series a 37ºC durante 24h.

RESULTADOS

- Resultado positivo: turbidez+gas en la campana.

- Turbidez: crecimiento.

- Gas en la campana: fermentación de la lactosa con formación de ácido y gas.

- Lectura usando la tabla NMP (recuento de coliformes totales por ml de muestra analizada).

CONCLUSIONES:

- Los coliformes se caracterizan por su capacidad para fermentar lactosa y con producción de ácido y gas.

- Se suelen utilizar como índice de contaminación fecal. Su nº en agua es proporcional al grado de contaminación fecal.

- Niveles altos de coliformes indican manipulación y elaboración deficientes de los alimentos.