Práctica 28. Preparación de medios de cultivo y siembra

MATERIAL:

- Balanza.

- Papel de aluminio.

- Cuchara.

- Placa calefactora.

- Cazo.

- Termómetro.

- Varilla agitadora.

- Placas de Petri.

- Matraz Erlenmeyer.

- Muestras del yogur y del huevo anteriormente preparados.

- Cinta adhesiva.

- Nevera.

- Estufa.

- Agua destilada.

- Embudo.

- Probeta.

- Papel de aluminio.

- Micropipeta.

- Pipeta Pasteur.

- Medio de cultivo: Agar estándar, Agar MacConkey Sorbita, Bilis verde.

PASOS A SEGUIR:

1. Cogemos 500ml de agua destilada en una probeta y lo echamos en el cazo. (Para los 3 medios de cultivo mismo paso).

2. Pesamos 11,75g de agar estándar en la balanza. Pesamos 20g de bilis verde. Pesamos 25,75g de MacConkey Sorbita.

3. Como había 3 placas calefactoras, fuimos haciéndolo por grupos.

4. Mezclamos lo que habíamos pesado con los 500ml de agua destilada y lo ponemos en el cazo para calentarlo en la placa calefactora. Tienen que llegar a los 100ºC.

5. Una vez consigue dicha temperatura, lo echamos con ayuda de un embudo en un matraz Erlenmeyer. Tiene que enfriarse hasta llegar a 50ºC.

6. Echamos muestra de huevo y yogur preparado en la práctica del stomacher en una placa de Petri. Lo hacemos por inundación. Hicimos por inundación 10 placas de huevo con el agar estándar, 8 placas de huevo con bilis verde y 9 placas de yogur con MacConkey Sorbita.

7. Dejamos que gelifique y lo metemos en la estufa.

8. Las placas restantes las hicimos por la técnica de Barry, es decir, la muestra encima del medio de cultivo ya gelificado. Lo hacemos con una micropipeta (1-2ml) y quitamos el exceso con una pipeta Pasteur. Se mete en la estufa.

9. Las placas de bilis verde las tenemos que dejar más tiempo para que gelifiquen (2h) y tapadas con papel de aluminio porque son fotosensibles. Lo miramos al día siguiente y nos dimos cuenta de lo que no utilizamos agar, por lo que no funcionó.